核酸質(zhì)譜介紹 

基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)因日本島津公司的田中耕一“開發(fā)了用于生物大分子質(zhì)譜分析的軟解吸電離方法”獲得2002年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)而首次廣泛地走進(jìn)公眾視野。

TOF的原理是離子在電場(chǎng)作用下加速飛過飛行管道，根據(jù)到達(dá)檢測(cè)器的飛行時(shí)間不同而被檢測(cè)即測(cè)定離子的質(zhì)荷比與離子的飛行時(shí)間成正比檢測(cè)離子。MALDI-TOF-MS具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高及分辨率高等特點(diǎn)，為生命科學(xué)等領(lǐng)域提供了一種強(qiáng)有力的分析測(cè)試手段，并正扮演著越來越重要的作用。

在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域，MALDI-TOF MS主要用于臨床微生物鑒定、基因分型分析、生物標(biāo)志物鑒定、病原體鑒定、質(zhì)譜成像等應(yīng)用的發(fā)展，因?yàn)槠潇`敏度高、準(zhǔn)確度高及分辨率高等特點(diǎn)越來越被臨床檢測(cè)領(lǐng)域所青睞。在核酸檢測(cè)這個(gè)細(xì)分領(lǐng)域，MALDI-TOF MS技術(shù)用于中等通量定性和定量的SNP及基因突變檢測(cè)，DNA甲基化的定量檢測(cè)及CNV檢測(cè)等。

其獨(dú)特的多重PCR技術(shù)，穩(wěn)定準(zhǔn)確的結(jié)果，精準(zhǔn)定量的能力，經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)成本，使核酸質(zhì)譜在基因檢測(cè)領(lǐng)域具有極大的競(jìng)爭(zhēng)力和廣闊的應(yīng)用前景。隨著臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)核酸質(zhì)譜的了解和應(yīng)用不斷的加深，未來該檢測(cè)平臺(tái)或可成為規(guī)范實(shí)驗(yàn)室不可或缺的標(biāo)準(zhǔn)裝備。

DNA甲基化介紹

甲基化與腫瘤

DNA甲基化（DNA methylation）是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMT）催化下，以S-腺苷甲硫氨酸為甲基供體，將活性甲基轉(zhuǎn)移至DNA鏈中特定堿基上的化學(xué)修飾過程。哺乳動(dòng)物基因組中，DNA甲基化多發(fā)生在CpG二核苷酸中的胞嘧啶的5位碳原子。DNA甲基化是一種表觀（epigenetic）修飾，它在不改變DNA序列的情況下，對(duì)個(gè)體的生長(zhǎng)、發(fā)育、基因表達(dá)模式以及基因組的穩(wěn)定性起到重要的調(diào)控作用，并且這種修飾在發(fā)育和細(xì)胞增殖的過程中是可以穩(wěn)定傳遞的。近年來的大量研究表明，DNA異常甲基化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、細(xì)胞癌變有著密切的聯(lián)系。

DNA甲基化作為腫瘤生物標(biāo)志物

DNA甲基化在腫瘤中的作用主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：一是甲基化的CpG島二核苷酸中的胞嘧啶以較高的頻率脫氨基變成胸腺嘧啶，造成基因突變；二是抑癌基因和DNA修復(fù)基因由于超甲基化而沉默；三是癌基因甲基化水平降低而活化；四是基因組總體甲基化水平降低使轉(zhuǎn)座子、重復(fù)序列活化導(dǎo)致染色體穩(wěn)定性下降。這些因素是導(dǎo)致腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移、惡化最終導(dǎo)致患者死亡的重要原因。DNA總體甲基化水平（即甲基化譜）和特定基因甲基化程度改變可作為腫瘤診斷指標(biāo)。

甲基化與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移

DNA甲基化在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用，如有研究發(fā)現(xiàn)了數(shù)個(gè)可以誘導(dǎo)EMT的轉(zhuǎn)錄因子，在正常細(xì)胞中它們表現(xiàn)為高甲基化水平因而其表達(dá)受到抑制，但在腫瘤細(xì)胞中它們的甲基化水平偏低而出現(xiàn)高表達(dá)。利用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（methyltransferase）抑制劑5-氮雜胞苷（5-aza-cytidine）處理MCF-7乳腺癌細(xì)胞，使其維持低甲基化狀態(tài)，結(jié)果顯示與EMT過程相關(guān)的促細(xì)胞侵襲基因（pro-invasive EMT-associated gene）表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞的侵襲能力和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。此類研究結(jié)果值得我們深思，采用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑來治療腫瘤固然可能抑制原癌基因的表達(dá)，但也可能造成腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移播散增加的風(fēng)險(xiǎn)

甲基化與腫瘤治療

腫瘤預(yù)防和治療的一個(gè)手段是通過去甲基化恢復(fù)某些關(guān)鍵的抑癌基因或DNA修復(fù)基因的活性，目前研究最多的是DNMTs抑制劑，它通過抑制DNMT活性以逆轉(zhuǎn)異常的DNA甲基化。第一個(gè)表型修飾藥物為5-azacytidine及其類似物5-aza-2'-deoxycytidine（5-aza-CdR），這類藥物已經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于白血病前骨髓增生異常綜合征的治療。5-aza-CdR是胞嘧啶的類似物，在DNA復(fù)制過程中可以摻入到DNA鏈中，一方面它可以降低DNA接收甲基的能力，另一方面它抑制DNMT活性，導(dǎo)致DNA甲基化水平的降低。體外和體內(nèi)試驗(yàn)均表明，5-aza-CdR具有降低超甲基化的抑癌基因甲基化水平從而抑制腫瘤的能力，臨床表明應(yīng)用5-aza-CdR可提高部分IV期小細(xì)胞肺癌患者生存率，但該藥也存在著不可忽視的毒副作用（如特異性不強(qiáng)，不能針對(duì)某一特定抑癌基因進(jìn)行靶向治療；高劑量的5-aza-CdR可能誘發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移），因此其在臨床上的應(yīng)用受到了很大限制。也有研究表明，低劑量的As2O3可起到治療肝癌的目的。

平臺(tái)優(yōu)勢(shì)介紹

1質(zhì)譜是分析領(lǐng)域檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，精準(zhǔn)核酸質(zhì)譜平臺(tái)，可保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性

2物理參數(shù)通過直接測(cè)定得到，數(shù)據(jù)穩(wěn)定，不會(huì)失真

3直接出結(jié)果，無需生信分析，數(shù)據(jù)更容易解讀